Флуарэсцэнтны мікраскоп - гэта тып аптычнага мікраскопа, які выкарыстоўвае крыніцу святла высокай інтэнсіўнасці для асвятлення ўзору і ўзбуджэння флуорохромов ў пробе. Асвятленне ўзору звычайна вырабляецца крыніцай святла, якая выпраменьвае ультрафіялетавае святло. Яны шырока выкарыстоўваюцца ў біялагічнай, медыцынскай і прамысловай галінах.
Як працуе флуарэсцэнтны мікраскоп?
Флуарэсцэнтны мікраскоп выкарыстоўвае ртутную або ксенонавую лямпу для атрымання ультрафіялетавага святла. Святло трапляе ў мікраскоп і трапляе ў дыхроічнае люстэрка — люстэрка, якое адлюстроўвае адзін дыяпазон даўжынь хваль і дазваляе іншаму дыяпазону праходзіць. Дыкротычнае люстэрка адлюстроўвае ультрафіялетавае святло да ўзору. Некаторыя ўзоры натуральна флуарэсцэнтуюць пад ультрафіялетавым святлом, таму што яны ўтрымліваюць флуарэсцэнтныя рэчывы, такія як хларафіл. Калі ўзор для прагляду не флюарэсцэнтуе натуральным чынам, яго можна афарбаваць флюарэсцэнтнымі фарбавальнікамі, якія называюцца флюарахромамі.
З чаго складаецца флуарэсцэнтны мікраскоп?
1. Крыніца святла
Самыя распаўсюджаныя крыніцы святла - ртуць, ксенон і святлодыёды. Ртуць забяспечвае лепшую якасць святла для флуарэсцэнтнага мікраскопа. Святлодыёды становяцца ўсё больш папулярнымі, таму што яны менш дарагія, чым іншыя крыніцы, і спажываюць менш энергіі.
| Ртутная лямпа | Ксенонавая лямпа | святлодыёд | |
| Даўжыня хвалі выпраменьванага святла | 350-370 нм | 400 нм ~ 450 нм | 400-700 нм |
| Тэрмін службы (гадзіна) | 200-300 | 400-600 | 10000 |
| Перавага | 1. Святло высокай інтэнсіўнасці, найбольш распаўсюджаныя крыніцы святла. 2. Ён выпраменьвае моцнае ультрафіялетавае і сіне-фіялетавае святло для ўзбуджэння ўсіх відаў флюарафораў. 3. Яркія і маляўнічыя выявы. | 1. Спектральная інтэнсіўнасць стабільная. 2. Моцная спектральная інтэнсіўнасць у інфрачырвоным і сярэднім інфрачырвоным дыяпазонах. | 1. Лёгка замяніць. 2. Не трэба размінацца. 3. Можа быць уключаны і выключаны імгненна. 4. Кіруйце інтэнсіўнасцю крыніцы святла. |
| Недахоп | 1. Кароткае жыццё. 2. Доўгі час разагрэву. | 1. Спецыяльны блок харчавання пастаяннага току нізкага напружання патрабуецца для залішняга цяпла. 2. Даражэй, чым ртутная лямпа | 1. УФ-прамяні слабейшыя за ртутныя лямпы. 2. Кожная даўжыня хвалі святла патрабуе асобнага святлодыёда з-за вузкай прапускной здольнасці, якую яны выпраменьваюць. |
Флуарэсцэнтная насадка Mercury
Святлодыёдная люмінесцэнтная насадка
2. Фільтр ўзбуджэння
Фільтр узбуджэння неабходны для працы флуарэсцэнтнага мікраскопа. Ён прапускае святло больш кароткай даўжыні хвалі, якое можа паглынуць флуоресцентный фарбавальнік. Акрамя таго, ён блакуе іншыя крыніцы захапляльнага святла.
Фільтр узбуджэння (B,G,U,V)
3. Дихроическое люстэрка
Дыхроічнае люстэрка - гэта тып аптычнага фільтра, які адлюстроўвае святло на пэўных даўжынях хваль, прапускаючы іншыя. Ён выкарыстоўваецца ў флуарэсцэнтных мікраскопах для падзелу даўжынь хваль узбуджэння і выпраменьвання.
4. Эмісійны фільтр
Эмісійны фільтр прапускае толькі даўжыні хваль, выпраменьваныя флюарафорам, і блакуе ўсё непажаданае святло за межамі гэтай паласы - асабліва хвалі ўзбуджэння.
5. Флуарэсцэнтныя фарбавальнікі
Флуарэсцэнтныя фарбавальнікі - гэта арганічныя злучэнні, якія валодаюць уласцівасцю флуарэсцэнцыі, з дапамогай якой яны могуць фармаваць флуарэсцэнтны малюнак, выпраменьваючы высокакантрастнае бачнае зялёнае святло пасля ўзбуджэння ад яркага ультрафіялетавага святла. Звычайна выкарыстоўваюцца флуоресцентные фарбавальнікі; DAPI (49,6-дыямідзіна-2-феніліндол), акрыдынавы аранжавы, аўрамін-радамін, Alexa Fluors або DyLight 488.
Колькі тыпаў флуарэсцэнтных мікраскопаў?
1. Вертыкальны эпіфлюарэсцэнтны мікраскоп:
Гэта найбольш распаўсюджаны тып флуарэсцэнтнага мікраскопа. Узбуджэнне флюарафора і выяўленне флуарэсцэнцыі ажыццяўляюцца праз адзін і той жа шлях святла (г.зн. праз аб'ектыў). Большасць флуарэсцэнтных мікраскопаў, асабліва тых, што выкарыстоўваюцца ў біялагічных навуках, маюць эпіфлюарэсцэнтную канструкцыю.
Даследчы флуоресцентный біялагічны мікраскоп BS-2081F
2. Канфакальны флуарэсцэнтны мікраскоп:
Канфакальны флуарэсцэнтны мікраскоп: гэты тып флуарэсцэнтнага мікраскопа спалучае лазернае сканаванне з флуарэсцэнтным асвятленнем для атрымання выявы. Яго можна выкарыстоўваць у шырокім спектры прымянення, напрыклад, для вывучэння клетак і тканак, выяўлення бялкоў і іншых рэчываў у клетках і вымярэння таўшчыні матэрыялаў.
Даследчы флуоресцентный біялагічны мікраскоп BS-2081F
3. Інвертаваны люмінесцэнтны мікраскоп
Крыніца святла і кандэнсатар такога мікраскопа размешчаны зверху ўніз. Кут асвятлення павінен складаць 90 градусаў у адносінах да паверхні доследнага ўзору.
Інвертаваны люмінесцэнтны мікраскоп BS-2095F
Якія перавагі і недахопы флуарэсцэнтных мікраскопаў?
Перавагі:
- Дазваляе назіраць клеткі ў жывых арганізмах, не пашкоджваючы іх
- Забяспечвае выявы высокага дазволу з дакладнымі колерамі
- Дазваляе вывучаць жывыя працэсы ў клетках
- Выкарыстоўвацца для ідэнтыфікацыі розных тыпаў малекул ўнутры клетак, такіх як бялкі або нуклеінавыя кіслоты.
Недахопы:
-Гэта дазваляе назіраць толькі за пэўнымі структурамі ўнутры клеткі, пазначанай флуоресцентным фарбавальнікам.
- Фотаадбельванне з-за ўзбуджэння электронаў падчас працэсу флуарэсцэнцыі можа паўплываць на рэактыўныя малекулы флуарэсцэнтных фарбавальнікаў. У выніку рэактыўныя фарбавальнікі могуць страціць сваю хімічную ўласцівасць інтэнсіўнасці флуарэсцэнцыі.
-Клеткі адчувальныя да фототоксического эфекту пасля афарбоўвання флуоресцентными фарбавальнікамі, паколькі малекулы флюарафораў паглынаюць фатоны высокай энергіі з кароткахвалевага святла.
Якое прымяненне флуарэсцэнтнага мікраскопа?
Флуарэсцэнтныя мікраскопы шырока выкарыстоўваюцца ў розных галінах даследаванняў і прымянення, уключаючы біяхімію, клетачную біялогію, мікрабіялогію, імуналогію і медыцыну.
1. У галіне біялогіі флуарэсцэнтны мікраскоп дазваляе дакладна і дэталёва ідэнтыфікаваць клеткавыя і субмікраскапічныя клеткавыя кампаненты і дзейнасць з дапамогай маркіроўкі флуоресцентным фарбавальнікам.
2. У галіне медыцыны флуарэсцэнтны мікраскоп можа выкарыстоўваць флуоресцентные рэагенты для выяўлення наяўнасці і распаўсюджвання бактэрый і вірусаў або для дапамогі ў маркіроўцы хірургічных мішэняў для палягчэння аперацыі.
3. У галіне мінералогіі флуарэсцэнтны мікраскоп часта выкарыстоўваецца для вывучэння рэчываў са ўласцівасцямі спантаннай флуарэсцэнцыі, такіх як асфальт, нафта, вугаль, аксід графена і іншыя мінералы.
4. У матэрыялазнаўстве флуарэсцэнтны мікраскоп можна выкарыстоўваць у тэкстыльнай або папяровай прамысловасці для аналізу матэрыялаў на аснове валокнаў.
Час публікацыі: 14 сакавіка 2023 г